【实验技术】外泌体示踪方法，你值得拥有！

外泌体专题系列又来啦，先前我们一起研究分享了外泌体的分离提取与鉴定，那接下来我们要知道，外泌体作为传递重要信息的载体，它最终又哪去了呢？这不，科学家们纷纷想出奇招，给外泌体添加了各种“GPS定位系统”标记它的行踪，今天我们就一起了解下外泌体的示踪方法，了解这些方法是如何带我们探究外泌体的生物分布、生理功能、迁移和靶向机制的~先来向大家介绍一下目前比较常见的外泌体示踪方法~一、亲脂性荧光染料示踪外泌体目前常用的亲脂性荧光染料包括DiO、Dil、DiR、DiD、PKH26…

【国自然热点推荐】肿瘤免疫治疗+肿瘤相关巨噬细胞研究思路 | 王炸组合研究思路保你茅塞顿开

随着人类对癌症的了解越发深入，对癌症的研究也不再局限于癌细胞本身，而是将目光投放于癌细胞置身的环境——肿瘤微环境（Tumor microenvironment，TME）中。TME中浸润着诸多免疫细胞，这些人体中的“战士”们毫无疑问处于抗击肿瘤的最前线，而辅助这些“战士”的治疗手段——肿瘤免疫治疗，则在近年逐渐成为国自然的一大热点。肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages，TAMs）作为TME中分布最广泛的一类细胞，顺理成章地成为了肿瘤免疫治疗中的关键角色，相关国自然中标项目更…

T细胞耗竭与胆固醇代谢的关系：或可应用于肿瘤免疫治疗

今天给大家带来的这篇文章2023年5月发表在Cancer Cell上，论文标题为“Exhaustion-associated cholesterol deficiency dampens the cytotoxic arm of antitumor immunity”。中科院分子细胞科学卓越创新中心许琛琦团队与武汉大学生科院宋保亮院士团队合作，研究绘制了肿瘤微环境中胆固醇图谱，揭示胆固醇缺乏驱动肿瘤微环境中T细胞耗竭和功能障碍的机制。通过CRISPR-Cas9敲除CAR-T细胞的LXRβ，能够解除胆固醇缺乏导致的T细胞耗竭和功能障碍，从而显著增强CAR-T的肝癌治疗效果。临床问…

动物实验知多少——裸鼠皮下成瘤实验技巧

背景裸鼠成瘤实验，是一种用于研究肿瘤发生和发展的动物实验。裸鼠是一种无毛、免疫缺陷的小鼠，在体内移植外源性肿瘤细胞后，由于其免疫系统不完整，不会对异物产生免疫反应，因此，肿瘤细胞可以不受抵抗地存活和生长。通过裸鼠成瘤实验，可以研究肿瘤细胞在体内的生长、转移、药物治疗等方面的情况，为开发新的肿瘤治疗方法和药物提供重要的实验数据。但是，裸鼠成瘤实验涉及动物权益和伦理问题，需要在符合伦理和法律规定的条件下进行。实验室常见成瘤细胞/Common tumorigenic cell…

IF 23.1Gut|乳酸化修饰新突破！复大虞先濬团队揭示“乳酸代谢-表观遗传-胆固醇免疫抑制轴”新机制，内容实在精彩！

说到乳酸化这个赛道，第一想到的就是一系列顶刊，这个赛道可以说是是卧虎藏龙！就乳酸化修饰的文章，随随便便找出一篇都很不错，这不今天就发现一篇内容是非常精彩的文章，跟着康旭禾一起来看看吧~看文章之前咱们来看看这篇文章的作者：虞先濬教授，现任复大肿瘤医院院长，主要研究集中在胰腺方向。总IF超过1600分，在《Cancer Cell》《Cell Res》《J Clin Oncol》等发表SCI论文260+，单篇论著最高IF 48.8.可以看出虞教授也是咱们的标杆人物了，大佬的思路可得好好学一下，那就说说该团…

干货收藏 | WB, IHC实验问题总结与处理方案详解

1、western blot 的优点答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？答：原因有很多：a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必须加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长， …

肿瘤研究基础---Transwell迁移/侵袭实验

对肿瘤的研究，主要包括功能研究和机制研究，细胞功能的研究主要是体现肿瘤生物学特性。其中肿瘤细胞的迁移、侵袭功能研究是必不可少的，肿瘤细胞的迁移侵袭能力的研究，也为后续信号通路、功能机制研究打下基础。 Transwell 迁移、侵袭实验主要用于检测肿瘤细胞体外的迁移、侵袭能力，由此可见，做好Transwell迁移侵袭实验是至关重要的。1.实验原理 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以…

经典蛋白翻译后修饰----乙酰化修饰

蛋白质乙酰化修饰，顾名思义指的就是在蛋白质原有基础上面嫁接上乙酰化基团。在细胞中，乙酰化修饰的反应由乙酰基转移酶所催化，将乙酰辅酶A的乙酰基转移并添加在蛋白质赖氨酸残基上。在早期的研究中，乙酰化修饰一直被认为是真核细胞所特有的一种翻译后修饰，直到后来研究发现原核细胞中也存在着蛋白质乙酰化修饰。所以，乙酰化修饰是原核和真核生物所共有的一种翻译后修饰类型。 蛋白的乙酰化修饰早在20世纪60年代就被发现了，但真正受到科学界“追捧”却是经历长达半个世纪的“…

文献精读——代谢+铜死亡双重调控拿下IF=48.8 Cancer Cell

01文章基本信息周杨、姚兵等团队在《Cancer Cell》（IF=48.8）发表的研究揭示，缺氧诱导因子 - 1α（HIF-1α）调控肿瘤铜死亡，其核心机制包括 HIF-1α 通过激活 PDK1/3 抑制线粒体 TCA 循环关键酶 DLAT 表达、促进金属硫蛋白 MT2A 积累以螯合线粒体铜，以及铜离子直接结合 HIF-1α 抑制其泛素化降解并稳定蛋白原文链接：https://doi.org/10.1016/j.ccell.2025.02.01502文章概述研究背景铜死亡机制与铜稳态失衡及 TCA 循环中脂酰化蛋白异常聚集相关。实体肿瘤常处于缺氧微环境，而缺氧…

细胞焦亡研究方法汇总

程序性细胞死亡(Programmed Cell Death, PCD)，是指细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后，为了维持内环境稳定而发生的一种主动性消亡过程。凋亡、自噬、细胞程序性坏死、细胞焦亡都是是程序性死亡的表现形式。细胞焦亡是一种最新发现的炎症细胞程序性死亡方式，主要通过炎症小体介导包含Caspase-1在内的多种Caspase的激活，造成包括GSDMD在内的多种Gasdermin家族成员发生剪切和多聚化，造成细胞穿孔，进而引起细胞死亡。相比于细胞凋亡（apoptosis），细胞焦亡发生的更快，并会伴随着…

速存！常用的实验鼠 + 动物实验技术

动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且在方法和道义上也受到限制。借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便，更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。1.方案设计01常用动物实验选择1. 名 称：KM 小鼠主要用途：广泛应用于药理学、毒…

2025年肿瘤研究的热点方向：乳酸化修饰

在肿瘤的复杂世界里，代谢异常与免疫逃逸始终是两大核心难题。最新研究发现，一种由乳酸驱动的赖氨酸乳酰化修饰（Lactylation），正成为连接代谢与免疫的关键 “分子桥梁”。它不仅重塑肿瘤微环境（TME），还为肿瘤耐药（靶向治疗、免疫治疗、化疗）提供了温床。今天，我们将深入解读这一前沿领域，揭开肿瘤代谢调控的神秘面纱。一、乳酸化修饰：从代谢废物到致癌信使长久以来，乳酸被视为肿瘤细胞糖酵解的“废物”，但近年来研究发现，它竟是一种关键的表观遗传调控分子。什么是乳酰化…

国自然潜力热点——“调节性B细胞”来袭！南医大团队也在做，出手就是11分+，快上车！

在咱们所熟悉的免疫细胞亚群中，调节性T细胞（CD4+Treg）应该是大家关注的比较多的亚群吧。但是今天薇老师想给大家分享点不一样的，咱们来聊聊调节性B细胞（Bregs）。首先，什么是Bregs呢？这是一类具有免疫调节功能的B淋巴细胞亚群。传统B细胞主要负责通过产生抗体的形式清除病原体，而Bregs则主要通过分泌细胞因子或与其他免疫细胞互作调节免疫反应，以维持免疫系统稳态。而也正是因为Bregs在免疫调节中的关键作用，因此它在肿瘤、自身免疫疾病、感染性疾病、过敏性疾病、代谢性疾病…

动物模型构建：顶刊23分文章带你弄懂胰腺炎

大小鼠胰腺炎模型小伙伴们，大家好，今天我们将通过一篇文章来了解大小鼠的胰腺炎模型，本文发表在2024年1区Top医学期刊《Gut》上，影响因子为23。标题为“Pancreas-directed AAV8-hSPINK1 gene therapy safely and effectively protects against pancreatitis in mice”。文章讨论是一种基于腺相关病毒（AAV8）介导的人类SPINK1基因（hSPINK1），在感染小鼠的胰腺转导效率和安全性，以及三种小鼠模型（雨蛙素诱导、胰管结扎和Spink1 C .194+2T>C小鼠模型）中预防和治疗胰腺炎的效果…

细胞死亡没啥可研究的了？哈尔滨医科大学教你整出新花样：细胞焦亡+炎症小体+乙酰化+类器官，这“逆天”思路审稿人看了都点赞！

亲爱的小伙伴们，你们最近科研进展的还顺利吗？最近看到一个新闻非常气愤，广东工业大学有两研究生，他们暑假留校参与课题科研工作，但因为午休时间打游戏看视频娱乐被严厉地处罚。真的是没有天理了啊，午休时间都不能让人休息。还是建议各位小伙伴们要适当的娱乐休息，这样才能更好地投入科研事业！接下来给大家推荐一篇思路绝佳的文章，它将细胞焦亡、炎症小体、乙酰化和类器官结合在一起，快来看一下吧~1.多种方法进行验证：研究使用各种技术评估了用抗肿瘤药物治疗的CRC细胞中的细…

【科研必备】秒懂文献蛋白互作图：从 STRING 网络到 Co-IP 结果的全类型解析！

一、酵母双杂交酵母双杂交实验是一种经典的分子生物学技术，广泛用于研究蛋白质之间的相互作用。本实验旨在通过酵母双杂交系统验证NF-YC9蛋白与BIN2蛋白之间是否存在相互作用。实验设计包括以下几部分：1. 实验材料与培养基培养基：二缺板（SD/-Trp/-Leu）：用于初步筛选融合蛋白的表达情况，同时排除单个融合蛋白的自激活现象。四缺板（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）：用于进一步验证蛋白质之间的相互作用，通过检测报告基因（如HIS3和ADE2）的表达来判断互作的强度和可靠性。2. 实验分组…

开启你的第一个单细胞测序研究：保姆级课题设计思路全梳理

单细胞测序技术能够提供前所未有的细胞分辨率，揭示组织内不同细胞类型之间的异质性。其分析难点主要在于：如何从繁杂的数据中发现线索，并通过分析和后续湿实验来验证该线索。因此不仅需要了解该疾病的病理过程（研究方向，如有药物还要了解药理等信息）、疾病相关组织的病理特点和过程、参与某个病理过程的细胞群及其功能表型、调控细胞群表型的分子和机制等信息，还需要了解验证某个线索需要用到的分析方法、实验方法以及该方法的优势和局限性。在拥有单细胞测序数据后，如何有效地…

动物实验 ▏小鼠T淋巴细胞 CTLL-2 培养攻略

小鼠T淋巴细胞 CTLL-2细胞名称：CTLL-2中文名称：小鼠T淋巴细胞种属来源：小鼠组织来源：T细胞细胞形态：淋巴母细胞样生长特性：悬浮生长培养条件：气相：95%空气，5%二氧化碳温度：37℃培养基与添加物：基础培养基：RPMI-1640添加物：10%特级胎牛血清（FBS）、100U/ml（或100IU/ml）IL-2、1%青霉素/链霉素（P/S）注意，有些培养体系可能略有不同，但核心成分通常包括RPMI-1640、FBS和IL-2。细胞培养步骤1. 细胞复苏①从液氮罐或-80℃冰箱中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中摇晃解冻。②…

中医药思路翻新！安徽医科大学：网药+肠道菌群+氨基酸代谢+动物实验，斩获Phytomedicine，创新思路不翻车！

最近，有朋友问，想通过中医药发文，周期长不长？如果单纯通过实验发文的话确实会面临周期长的问题那有什么能缩短发文周期的方法吗？小编推荐大家结合生信技术！比如网络药理学、分子对接等。有了这些分析方法的助攻，可以缩短发文周期！如果想更快，可以采用生信为主、实验为辅的模式！今天，小编给大家带来一篇中医药新思路。作者创新性地采用多种联合分析（网络药理学（NP）与代谢组学联合分析、肠道菌群测序技术与代谢组学联合分析），探索中药汤剂在慢性萎缩性胃炎伴肝郁脾虚中的…

铁死亡在心血管疾病中的调控机制及相关动物模型构建思路!

往期我们讲过铁死亡的主要调控机制和通路：