外泌体专题系列又来啦，先前我们一起研究分享了外泌体的分离提取与鉴定，那接下来我们要知道，外泌体作为传递重要信息的载体，它最终又哪去了呢？这不，科学家们纷纷想出奇招，给外泌体添加了各种“GPS定位系统”标记它的行踪，今天我们就一起了解下外泌体的示踪方法，了解这些方法是如何带我们探究外泌体的生物分布、生理功能、迁移和靶向机制的~

先来向大家介绍一下目前比较常见的外泌体示踪方法~

一、亲脂性荧光染料示踪外泌体

目前常用的亲脂性荧光染料包括DiO、Dil、DiR、DiD、PKH26、PKH67等，顾名思义，这些荧光染料可以稳定的与细胞膜脂质区和其他脂溶性生物结构相结合，结合后荧光强度大大增强且稳定，下面小编展示了使用这类染料对外泌体标记的文献结果图片。

1、DiO

在癌细胞缺氧研究中，作者使用DiO标记外泌体，下图荧光显微镜观察了缺氧癌细胞对四种不同处理来源的外泌体摄取情况，其中绿色荧光标记的即为外泌体。

图1 DiO染料将外泌体标记为绿色

（图片来源：PMID_29890363）

2、Dil

自噬与外泌体在脑辐射所致的急性肺损伤研究中，Dil染料将外泌体染成红色荧光，如下图，从结果图上看，外泌体被星形胶质细胞内化。

图2 Dil染料将外泌体标记为红色

（图片来源：PMID_29104495）

3、DiR

在血液外泌体研究中，给小鼠静脉注射DiR标记的外泌体后，可扫描分析小鼠体内各部分DiR信号，从而进行相关机制分析。

图3 DiR染料标记外泌体进行活体成像检测

（图片来源：PMID_30429877）

、PKH67

在研究人脂肪间充质干细胞治疗肾纤维化的报道中，将人脂肪间充质干细胞外泌体通过尾静脉注射UUO模型小鼠体内，通过荧光显微镜观察到UUO模型小鼠肾脏中外泌体被PKH67标记成绿色。

图4 PKH67染料将外泌体标记为绿色

（图片来源：PMID_32802201）

亲脂性荧光染料示踪外泌体由于操作简单，对检测仪器要求不高等优势近年来被广泛应用，但由于亲脂性荧光染料的特性，通常仅适用于纯化的外泌体，且无法追踪外泌体在细胞间的移动过程。随着技术手段的升级，越来越多的新方法出现在大众的视野中~

二、MPI体内追踪纳米（SPIO）示踪外泌体

MPI磁性粒子成像系统是基于功能和断层影像技术检测磁性纳米颗粒空间分布的示踪方法。使用临床认证的超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPIONs）作为示踪剂，有效提升了分辨率。近两年MPI在生命科学各个领域的应用研究都有着不错的进展。其应用领域包括细胞追踪、炎症追踪、药物递送与检测、血池造影、肿瘤检测等各个领域。

在体内外泌体示踪实验中，结果显示，通过用SPIO标记的细胞和外泌体具有明显不同的颜色，且MPI信号与外泌体数量成正相关（图5）。

图5 SPIO标记细胞和外泌体的肉眼观察及MPI成像

（图片来源：PMID_29890363）

图6中，首先TEM结果显示SPIO纳米颗粒成功的进入外泌体中，NanoSight纳米颗粒分析仪显示SPIO纳米颗粒标记后外泌体大小没有显著差异，MPI和Micro CT图像显示了健康小鼠外泌体的体内分布。

图6 SPIO标记外泌体进行活体成像检测

（图片来源：PMID_29890363）

除上述外泌体示踪外，随着研究的深入，学者们直接追踪到外泌体内容物进行检测，将外泌体与转化医学联系起来，为疾病的诊断和治疗带来重大改变，让我们一起开开眼界观摩一下学者们的智慧结晶！

一、液滴数字PCR示踪外泌体内容物

该方法是一种双靶点特异性适体识别激活外泌体膜上原位连接系统结合液滴数字PCR（ddPCR）的TRACER策略对肿瘤来源的外泌体PD-L1（Exo-PD-L1）进行精确定量分析。利用适配子的高亲和力、双适配子识别的优良选择性和ddPCR的高灵敏度，该方法以非水洗方式追踪肿瘤来源的Exo-PD-L1方面表现出显著的灵敏度和选择性。由于出色的敏感性，TRACER策略检测的肿瘤源性Exo-PD-L1水平能够有效区分癌症患者，首次确定作为肿瘤诊断标志物，Exo-PD-L1的水平检测比总Exo-PD-L1水平更可靠。

、高保真纳米探针（fLIGHT）示踪外泌体内容物

该方法设计了四面体纳米探针（fLIGHT），该探针可有效进入外泌体样小细胞外囊泡（sEVs），不仅不破坏sEVs结构，而且不会被sEVs内酶降解。进入sEVs后，fLIGHT结合发卡探针与靶标miRNA特异性互补，直接实现了sEVs内miRNA分子表达丰度的原位检测，成功建立了一种sEVs内miRNA分子在体可视化检测技术平台。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

联系我们

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

联系方式：15579126092      

公司官网：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌县小蓝VR产业基地D座2楼