【实验原理】

转录调控可以控制转录何时发生以及产生多少RNA。被RNA聚合酶转录的基因可被至少五种机制所调控：

特异性因子会改变RNA聚合酶对于特定启动子或一套启动子识别的特异性，使得RNA聚合酶更多或更少地结合到这些启动子上（如原核转录中用到的σ因子）。

阻遏因子会结合到DNA链上的靠近或覆盖启动子区域的那些非编码序列上，阻碍RNA聚合酶顺利进入此链，故阻碍了基因的表达。

通用转录因子：这些转录因子将RNA聚合酶安放至编码蛋白序列的起始位置，继而释放聚合酶以转录mRNA。

激活因子增强RNA聚合酶与特定启动子的相互作用，促进基因的表达。激活因子通过增强RNA聚合酶对启动子的吸引而达到此作用，这一机制是通过与RNA聚合酶亚基的相互作用或间接通过改变DNA结构而实现的。

增强子是位于DNA螺旋结构上的一些位点，它们通过与激活因子相结合以将DNA弯曲使特定启动子朝向起始复合物。

【实验步骤】

第一步:提取DNA样本

在进行转录因子和启动子实验之前，首先需要从细胞中提取DNA样本。DNA提取的方法有很多种，常用的包括CTAB法、琼脂糖法、商业DNA提取试剂盒等。选择合适的提取方法可以保证提取到质量较高的DNA样本。

第二步:PCR扩增目标序列

提取到DNA样本后，接下来需要进行PCR扩增目标序列。PCR是一种常用的分子生物学技术，通过PCR扩增可以获得足够的目标序列用于后续的实验。在进行PCR扩增时，需要设计合适的引物，控制PCR反应条件，确保扩增出纯净的目标序列。

第三步:构建启动子和转录因子的荧光报告基因载体

在实验中，我们通常会将启动子和转录因子的片段克隆到荧光报告基因载体中，用于研究基因的转录调控。构建载体需要进行酶切、连接、转化等步骤，确保载体的构建正确无误。

第四步:转染细胞并进行荧光素检测

构建好荧光报告基因载体后，需要将其转染至细胞中。转染的方法有多种，如化学转染、电转染等。转染后，可以通过荧光素检测等方法来研究启动子和转录因子的活性，了解基因的转录调控机制。

第五步:数据分析和结果解读

实验完成后，需要对实验结果进行数据分析和结果解读。可以通过荧光素检测结果来分析启动子和转录因子的活性，了解它们在基因转录调控中的作用。同时，还可以进行统计学分析，比较不同实验组之间的差异性，得出科学的结论。

【常见问题与注意事项】

1.样本数量要合理，样本之间的差异应该是由实验因素引起的;

2.满足RNA提取的高质量要求，并严格控制实验过程中的污染问题:3.在选择测序技术时，要充分考虑实验目标、样本特性和经费预算等因素;4.数据处理中的参数设置要合理，选择合适的参考基因组和分析软件;

5.结果解释中要进行生物学功能的富集分析，并进行实验验证;

6.注意保留丰富度高的信息，如剪接异构体和转录本等;

7.结果解释要基于已有的生物学知识，并结合其他实验数据进行分析。

【交付标准】

1. 实验报告 

2. 真实实验结果

3. 原始图片

4. 实验原始数据

5. 剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

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