背景

裸鼠成瘤实验，是一种用于研究肿瘤发生和发展的动物实验。裸鼠是一种无毛、免疫缺陷的小鼠，在体内移植外源性肿瘤细胞后，由于其免疫系统不完整，不会对异物产生免疫反应，因此，肿瘤细胞可以不受抵抗地存活和生长。

通过裸鼠成瘤实验，可以研究肿瘤细胞在体内的生长、转移、药物治疗等方面的情况，为开发新的肿瘤治疗方法和药物提供重要的实验数据。但是，裸鼠成瘤实验涉及动物权益和伦理问题，需要在符合伦理和法律规定的条件下进行。

实验室常见成瘤细胞/Common tumorigenic cells in laboratory

常规较容易成瘤的细胞：Hep-G2（肝癌），Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺癌)， A431(表皮癌)，SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌）SKBR3， A375/B16-F10（人黑色素瘤细胞），SGC7901 人胃肿瘤细胞 ，KB人口腔表皮样癌细胞

成瘤较慢的细胞：CNE（鼻咽癌），A549（肺癌）， SPC-A-1（肺腺癌）， HT-29（结肠癌），BEL-7402（肝癌），MDA-MB-231 乳腺癌 ， CT26 （小鼠结肠癌细胞 ），SH-SY5Y (人神经母细胞瘤细胞 ) ， U251 （人胶质瘤细胞） ， BGC-823（人胃癌细胞） ，PC-3 （人前列腺癌细胞）

一些比较有争议的细胞：Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。其他：BMSC（骨髓间充质干细胞）

成瘤实验技巧要点 /Key points of skill

细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中残余的血清。

用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1-0.2ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml，如若有条件的实验室，也可以加基质胶以加速瘤块的生成，基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。

细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成（如果接种量大，可以分批接种），途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢以保持细胞的活性。

选择的裸鼠一般在4-6周龄，体重16-18g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部。

接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率，并且导致小鼠接种细胞数量的差异过大。

成瘤实验操作步骤 /Operating procedure

接种时选择好部位进针，选择血管丰富且容易操作的部位接种，如腋下、腹股沟、侧腹部及颈背部等部位都是较好操作的部位。

接种前用75%酒精棉球擦拭消毒进针位置，左手抓取固定裸鼠，于裸鼠左侧腋窝处皮下注射，接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，以减少注射时漏液和污染的可能性，注射前针头稍微动一动，以便细胞接种成团，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

接种体积为100μL-200μL，可看见明显鼓包。(这一过程尽量在半小时内完成，途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象。）

接种后1-2周左右可以见到皮下开始出现肿块。

注意要点

根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过2000mm3。

肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴，b为短轴)。

皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

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康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

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