巨噬细胞极化、巨噬细胞铁死亡、巨噬细胞代谢重编程、巨噬细胞吞噬、巨噬细胞迁移……小编想一定是这些研究热点的堆积，才一步步把巨噬细胞送上“国自然榜一”的地位~

在这些研究热点中，有一个隐藏颇深的热点可能很多小伙伴们还没发现，今天小编把它揪出来“公之于众”，让更多小伙伴们知道，巨噬细胞竟还会“布下天罗地网”！

噔~噔~噔~今天的重磅推荐——巨噬细胞胞外诱捕网（Macrophage Extracellular Traps，METs）来啦！

巨噬细胞胞外诱捕网——研究现状

深知大家时间宝贵，小编直接给小伙伴们上一些实实在在的内容~

METs相关获批国自然中标项目

追溯METs研究国自然获批项目历程发现，METs从2015年开始走进国自然，到2023年METs相关获批国自然项目共计14项，其中仅1项关于鼠伤寒沙门菌的研究项目获批于2015年，其余13项均获批于2019-2023年（详见图1）。小编着实没想到项目数量虽还不多，但涉及的疾病类型还挺广泛，其中包括肿瘤、肝脏缺血再灌注、肺损伤、肾间质纤维化、衰老相关脂肪组织代谢等等。

METs相关文献发表

目前在Pubmed上以“Macrophage Extracellular Traps METs”为关键词进行搜索，获得的文献数目尚少，仅百十来篇。文章虽然少，小编浏览后发现内有乾坤，不信您接着往下看！

✔《Immunity》文章

● 题目：膀胱黏膜下血管周围巨噬细胞构成的膀胱-血液免疫屏障可以抑制尿路病原体的播散

● 主要研究内容：

（1）通过单细胞RNA测序和流式细胞术鉴定，发现了定位于膀胱黏膜上皮下方、紧附于血管壁外侧的CX3CR1hi巨噬细胞新亚群，将之命名为suPVM（suburothelial perivascular macrophage）；

（2）suPVM可以预防急性膀胱炎导致的菌血症和尿路致病性大肠杆菌（UPEC）的全身扩散；

（3）suPVM利用METs将UPEC隔离在尿路上皮内，有效的限制了细菌到达富含血管的固有层和血液中；

（4）除隔绝细菌外，METs相关蛋白MMP13还可以促进中性粒细胞向尿路上皮迁移。

《Nature communications》文章

● 题目：程序性坏死增强“不要吃我”信号，诱导巨噬细胞胞外诱捕促进胰腺癌肝转移

● 主要研究内容：见图3。

✔《Journal of Hazardous Materials》文章

● 题目：聚苯乙烯微塑料通过诱导巨噬细胞胞外诱捕网的形成促进肝脏炎症

● 主要研究内容：

（1）聚苯乙烯微塑料（PS-MPs）诱导肝脏炎症以及METs的形成；

（2）巨噬细胞在暴露于PS-MPs后被激活，破坏线粒体动力学稳态，从而进一步激活线粒体自噬和溶酶体，最终导致溶酶体破裂和钙离子释放，诱导METs形成；

（3）阻断活性氧途径或自噬途径可以部分缓解PS-MPs诱导的线粒体和溶酶体损伤，抑制METs形成。

巨噬细胞胞外诱捕网——机制探索

从上述研究进展来看，METs可谓是进退得当，既能在高水平文章中“扛大旗”，也能在其他研究热点旁“当绿叶”。那接下来我们就系统了解下，METs到底是什么？它和中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）又有何不同？

METs的组成

METs的组成成分与NETs相似，主要由染色质、组蛋白和抗菌蛋白组成，据报道具体蛋白包括髓过氧化物酶（MPO）、基质金属蛋白酶12（MMP12）、溶菌酶、中性粒细胞弹性蛋白酶和乳铁蛋白等。

与NETs组成不同的是，METs的染色质骨架长度/来源以及蛋白质种类等与NETs存在差异，这些差异可能导致METs的抗菌能力低于NETs。

METs的激活及释放

METs的激活物主要包括以下两大类物质：一类是化学物质刺激，另一类是病原微生物刺激。

✔化学物质刺激主要由一些促炎因子组成，这表明METs的释放发生在炎症部位。

✔病原微生物刺激主要包括革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、各种寄生虫、真菌、抗酸杆菌以及益生菌等。

METs的激活物

METs的相关机制

目前根据不同作用机制将NETosis分类为自杀型NETosis（细胞膜解体，细胞死亡释放染色质）和活力型NETosis（细胞非裂解释放染色质）。虽然METs相关研究较少，但已有蛛丝马迹可以证实METs释放DNA的速率在不同刺激下也存在差异，由此推断METs和NETs作用机制类似。

此外，目前还发现了以下关键机制，这些机制可能是您的课题关联METs很好的切入点哦~

✔ M1型巨噬细胞更倾向于释放METs

比如您研究的疾病涉及到M1型巨噬细胞，那不妨去检测是否存在METs。

✔活性氧和Ca2+离子内流是METs的关键触发因素

比如您研究的疾病涉及ROS的产生和Ca2+离子内流，那下游机制也可以考虑METs。

✔组蛋白瓜氨酸化与METs释放相关，其中涉及PAD2或PAD4的激活

比如您研究的疾病涉及组蛋白瓜氨酸化、PAD2或PAD4异常表达激活，下游探讨METs也许是个不错的选择。

图7 METosis作用机制示意图

（图片来源：PMID_35191493）

巨噬细胞胞外诱捕网——落地实验

看到这里的小伙伴们可能真的对METs心动了，接下来小编为大家整理一些关于METs的落地基础实验，总不能让各位小伙伴空手离开吧，干货来喽~

由于METs的组成与NETs类似，所以二者检测手段也基本一致，实际上主要是检测DNA骨架和其中镶嵌的组蛋白、MPO以及MMP12等蛋白......

电镜观察

鉴定METs的金标准，利用扫描电子显微镜直接观察源自巨噬细胞的胞外诱捕网结构。

METs染色观察

利用免疫组织化学或免疫荧光染色对METs进行染色和标记，通过激光共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察。如下图，SYTOX Green（绿色）是死细胞核酸染料，可轻易穿过受损细胞膜而不能透过活细胞膜；Hoechest（蓝色）是膜通透性的荧光染料，主要用于活细胞标记。

METs组成蛋白的定量分析

利用免疫组织化学、免疫荧光染色、Western Blot检测citH3、MPO等蛋白的表达以及与巨噬细胞标志蛋白F4/80共定位情况。

细胞外释放DNA浓度检测

利用PicoGreen试剂检测细胞外释放的DNA浓度；定量SYTOX Green染色结果等。

DNaseI的应用

DNaseI是一种核酸酶，可以降解DNA，从而影响METs的形成。因此，DNaseI常被用于抑制METs的形成，以研究METs在疾病模型中的作用效果。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

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