一、常见的内参抗体

1.β-actin（42 kDa）

特点：β-actin 是细胞骨架的重要组成部分，广泛存在于大多数细胞和组织中，其表达相对稳定，且与众多目标蛋白的分子量差异较大，便于在 Western blot 实验中区分。

局限性：在肌肉组织中，β-actin 的高表达可能影响内参的准确性。此外，其聚合状态易受细胞信号转导的影响，从而导致表达水平发生变化。因此，在肌肉组织相关研究或涉及细胞信号转导的实验中，建议优先选择其他内参抗体，如 GAPDH 或 β-tubulin。

2.GAPDH（36 kDa）

特点：GAPDH 参与糖酵解等代谢过程，其在多数细胞和组织中表达较为稳定，且与多数目标蛋白的分子量差异较大，便于在 Western blot 实验中区分。此外，GAPDH 的价格适中，是常用的内参抗体之一。

局限性：在特定条件下，如缺氧等，GAPDH 的表达可能会发生改变。此外，若研究涉及糖代谢相关领域，GAPDH 的表达变化可能会影响内参的准确性。在这种情况下，建议选择 β-actin 作为替代内参抗体。

3.β-tubulin（55 kDa）

特点：β-tubulin 是细胞微管结构的重要组成部分，其表达相对稳定，能够与不同分子量的目标蛋白区分，适用于细胞骨架相关研究。

局限性：β-tubulin 的稳定性可能受到药物处理或细胞生理状态的影响。在某些特殊细胞类型或疾病模型中，其表达可能不稳定。因此，在这些情况下，GAPDH 可能是更好的选择。

二、如何选择内参抗体

1.目的蛋白分子量大小

在选择内参抗体时，应确保目的蛋白与内参蛋白的分子量相差至少5 kDa，以避免在Western blot实验中出现条带重叠，从而确保实验结果的准确性和可读性。

2.目的蛋白的细胞定位

①胞浆和全细胞蛋白：可选择β-actin（42 kDa）、GAPDH或β-tubulin。其中，β-actin在胞浆中表达高效且稳定，但理论上在细胞核内不表达，因此不能作为核蛋白的内参。

②胞核蛋白：可选择PCNA（GB12010）、Histone H3（GB11102）等，这些蛋白在细胞核中表达稳定，适合作为核蛋白的内参。

③核膜蛋白：可选择Lamin B1（GB111802），其在核膜中表达稳定，适合作为核膜蛋白的内参。

④线粒体蛋白：可选择COXIV（GB11250）、VDAC1（GB121939）等，这些蛋白在线粒体中表达稳定，适合作为线粒体蛋白的内参。

3.组织特异性

在脂肪组织中，β-actin的表达量较低，不适合作为内参抗体。

在脑组织中，β-tubulin的表达较高，而β-actin的表达量可能较低，因此建议选择β-tubulin作为内参。

在骨骼肌、心肌和平滑肌中，β-tubulin的表达可能发生变化或特化，而GAPDH的表达相对稳定，因此建议选择GAPDH作为内参。

不同组织和细胞类型对内参蛋白的适用性存在差异。例如：

对于其他来源的样本，如果研究较少，建议参考相关文献报道，选择合适的内参蛋白。

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