细胞凋亡（apoptosis）是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制控制，按照自身程序主动性、生理性的死亡过程。

细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。

No.1

Annexin V-FITC/PI双染色法

原理：

利用Annexin V结合凋亡细胞外翻的磷脂酰丝氨酸（PS），FITC标记显绿色荧光；PI（碘化丙啶）穿透死细胞膜染核显红色荧光，区分早期凋亡（Annexin V+/PI-）和晚期凋亡/坏死（Annexin V+/PI+）。

优点：

可区分早期凋亡与晚期凋亡/坏死。

流式细胞术定量，灵敏度高。

缺点：

需新鲜样本，固定会导致假阳性。

无法区分凋亡与铁死亡（同样PS外翻）。

No.2

TUNEL

原理：
检测DNA断裂（凋亡特征），末端转移酶将荧光标记的dUTP连接到DNA片段3'-OH端。

优点：

直接标记DNA断裂，特异性高。

可用于组织切片（如免疫组化）。

缺点：

可能标记非凋亡性DNA损伤（如坏死）。

操作复杂，成本较高。

No.3

Caspase活性检测

原理：

检测凋亡关键执行者Caspase家族（如Caspase-3）的活性，使用荧光底物（如DEVD-AMC）或抗体。

优点：

特异性强，与凋亡通路直接相关。

可区分不同Caspase亚型。

缺点：

某些情况下Caspase激活不依赖凋亡（如炎症）。需裂解细胞，无法单细胞分析。

No.4

线粒体膜电位检测（JC-1/DiOC6）

原理：
荧光染料JC-1在线粒体膜电位（ΔΨm）高时形成红色聚集体，电位下降（凋亡早期）时变为绿色单体。

优点：

反映早期凋亡事件（早于PS外翻）。

流式或荧光显微镜均可检测。

缺点：

其他细胞应激（如氧化损伤）也可降低ΔΨm。

JC-1可能对细胞有毒性。

No.5

 Hoechst 33342/PI双染色

原理：
Hoechst 33342穿透活细胞染核（凋亡细胞浓缩染色更强），PI仅进入死细胞。

优点：

简单经济，可观察核形态变化（凋亡小体）。

适合荧光显微镜观察。

缺点：

主观性强，需经验判断。

Hoechst可能淬灭或毒性。

No.6

DNA Ladder（琼脂糖凝胶电泳）

原理：

凋亡时DNA被内切酶切割成180-200bp片段，电泳呈阶梯状条带。

优点：

经典方法，直观显示DNA片段化。

成本低。

缺点：

灵敏度低（需大量细胞）。

无法区分凋亡与坏死（晚期凋亡可能弥散条带）。

No.7

流式细胞术（亚G1峰分析）

原理：
凋亡细胞DNA断裂丢失，PI染色后荧光强度低于G1期（亚G1峰）。

优点：

高通量，可与其他标记联用。

无需特殊试剂。

缺点：

无法区分凋亡与机械损伤或碎片。

需排除细胞周期干扰。

No.8

 透射电镜观察

原理：

直接观察凋亡细胞超微结构（如染色质凝聚、凋亡小体）。

优点：

金标准，提供形态学细节。

可区分凋亡与坏死。

缺点：

样本制备复杂，设备昂贵。

无法定量统计。

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动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

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