亲爱的科研同仁们,今日我们来深入探讨生物医学领域里四个易混淆的概念:转化、转导、转染及感染。尽管它们听似相近,实则内涵及应用背景大相径庭。接下来,我将逐一剖析它们的差异。
转化(Transformation)
定义:于分子克隆领域,转化专指将质粒DNA或以其为载体的重组子直接引入细菌细胞的过程。
分类:①染色体DNA转化:历经吸附、吸收、整合三阶段。DNA一旦被细胞摄取,即免受外源核酸酶分解。它初为双链,入胞后转单链,整合至细菌染色体。②质粒DNA转化:先以特定浓度钙离子预处理大肠杆菌,制备感受态,随后转化。此法效率优于染色体DNA转化。
应用:转化作为基因工程的关键技术(参见重组DNA技术),亦可能为作物育种及遗传病的基因治疗开辟新径。
(转化示意图)
转导(Transduction)
定义:分子克隆范畴内,转导专指利用噬菌体DNA作为媒介,将外源性DNA运送进细菌细胞的过程。
分类:
①普遍性转导:此类型中,噬菌体具备传递供体细菌任意基因的能力。例如,鼠伤寒沙门氏菌的P22、大肠杆菌的P1、枯草杆菌的PBS1、PBS2及SP10噬菌体,均属普遍性转导噬菌体。
②局限性转导:此情形下,噬菌体仅能传递供体染色体上紧邻原噬菌体整合位点的基因。大肠杆菌K-12的λ噬菌体与φ80噬菌体,即为局限性转导噬菌体的代表。
应用:转导在细菌遗传学研究中扮演重要角色,作为常用研究工具,它可实现细菌间基因的转移,便于进行互补测试、基因定位,尤其是通过共转导技术深入分析基因的精细结构。在遗传工程中,借助重组DNA技术,目标基因可被插入λ噬菌体DNA,随后通过体外包装技术,利用噬菌体外壳蛋白封装,最终感染宿主细胞,用于构建基因文库。
(转导示意图)
转染(Transfection)
定义:于分子克隆领域,转染专指将外源性基因导入哺乳动物细胞的一系列技术统称。
分类:
①瞬时转染:此过程中,外源DNA/RNA并不整合至宿主染色体,故单一宿主细胞内可含多个拷贝,实现高表达水平,但持续时间有限,通常仅数日,主要应用于启动子及调控元件的研究。
②稳定转染:外源DNA可整合入宿主染色体或作为游离态存在。
转染手段:
①化学法:涵盖DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法及人工脂质体法等;
②物理法:包括显微注射、电穿孔技术以及基因枪等。
(转染示意图)
感染(Infection)
定义:感染,作为医学术语,通常描述的是病原微生物(涵盖细菌、真菌、病毒等)侵入生物体并引发的病理生理反应过程。
应用实例:基于病毒能侵入人体并复制增殖的特性,科学家对病毒DNA进行改造,使其成为携带外源基因的载体。1990年,美国科学家率先利用反转录病毒作为载体,成功将腺苷脱氨酶基因(ada)导入患者自身的T淋巴细胞,经过扩增后回输给患者,这一里程碑式的成就开启了基因治疗的新纪元。
(感染示意图)
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