缺血性脑卒中是一种严重的神经系统疾病，其中组织损伤是导致死亡的主要原因。近年来的研究表明，缺血后的再灌注过程中产生的过量氧自由基在组织损伤中起着关键作用。因此，研究脑缺血再灌注损伤的作用机制已成为全球科学界的关注焦点。在众多研究方法中，线栓法因其操作简便、无需开颅、无需呼吸机辅助等优点，成为构建脑局部缺血再灌注损伤模型的首选方法。该方法能够精确控制缺血及再灌注的时间，并且对局部条件的控制较为容易，对全身的影响较小，是制作脑局部缺血再灌注损伤模型的理想选择。

本实验旨在通过线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注（Middle Cerebral Artery Ischemia/Reperfusion，MCAO/R）损伤模型。通过在再灌注后的不同时间点处死大鼠，本研究将探讨该模型制作方法的成功率、稳定性以及再灌注后不同时间点脑梗死体积的变化。这将为深入理解脑缺血再灌注损伤的病理机制提供重要的实验依据，并为开发新的治疗策略奠定基础。

01实验动物

雄性SD大鼠，体质量250～280g

02造模过程

1. 麻醉

采用异氟烷对大鼠进行吸入麻醉，调整异氟烷浓度以维持适宜的麻醉深度，确保大鼠在手术过程中无痛感且生命体征稳定。

2. 手术切口与血管暴露

■ 在大鼠颈部进行正中切口，剪开皮肤，分离皮下软组织，暴露颈动脉鞘。

■ 仔细分离右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。

3. 血管操作与栓塞放置

■在枕动脉以上结扎ECA，并在ECA靠近分叉处放置一备用线。

■使用动脉夹分别夹闭ICA和CCA。

■电凝刀离断枕动脉及ECA远心端，在ECA上剪一缺口，将备好的栓线经ECA插入ICA至栓线头部达到MCA起始处，用备用线打结固定栓线。

4. 血流恢复与伤口处理

■取下ICA、CCA的动脉夹，恢复血流。

■清理创口并缝合肌肉及皮肤，伤口消毒后局部使用抗生素预防感染。

5. 缺血再灌注操作

■在缺血2小时后拔出栓线，形成大鼠脑缺血再灌注损伤。

6. 假手术组处理

■假手术组大鼠与MCAO/R组操作步骤前部分相同，但不进行栓线插入操作。

7. 术后护理

■手术后将动物回笼饲养，密切观察其恢复情况，确保动物福利。

造模成功标准：大鼠清醒后1h，依照Longa5级4分制神经学评分原则对大鼠行为进行评分。Longa5级4分制评分原则：

① 0分，正常，无神经系统异常的体征。

② 1分，不能完全伸展病变对侧上肢。

③ 2分，行走时向对侧旋转。

④ 3分，行走时向对侧倾倒。

⑤ 4分，无自发活动伴意识降低。

得1-4分者为成功模型。术中意外死亡、再灌注24h内死亡、蛛网膜下腔出血的大鼠被剔除。

03实验结果

C1：假手术组 

C2：改良模型组

白色为梗死区域，红色为正常区域

假手术组大鼠冠状切面左右脑半球染色均匀、对称，灰质呈红色，白质呈浅红或瓷白色，无呈苍白色的梗死区(图C1)。模型组大鼠脑组织缺血侧可见皮质和(或)皮质下呈苍白色的梗死区域，包括基底核的外侧、顶叶和颞叶皮质、海马、纹状体等区域，与对侧半球呈红色的正常脑组织对比鲜明，白色区与红色区域之间界限不明显(图C2)。

参考文献-孙念霞,高维娟,易忠良.改良线栓法制作SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型[J].中国组织工程研究,2014,18(02):225-230.

(1)图A为假手术组大鼠海马CA1区各层细胞排列规则、整齐，神经突起自然排列，胞质内尼氏体为紫蓝色颗粒或块状结构，核圆形或椭圆形居中，核仁圆形居中，间质均匀、淡染。

(2)图B为模型组术侧海马区各层细胞排列紊乱，部分神经细胞消失，残存神经细胞胞膜皱缩内陷，神经纤维异常弯曲，胞质内尼氏体消失、淡染、模糊，核固缩均质化，核仁不规则、易位。

参考文献-孙念霞,高维娟,易忠良.改良线栓法制作SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型[J].中国组织工程研究,2014,18(02):225-230.

参考文献：

[1]孙念霞,高维娟,易忠良.改良线栓法制作SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型[J].中国组织工程研究,2014,18(02):225-230.

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