导语

在生命科学领域，分子间的相互作用是调控生命活动的核心机制。无论是DNA与蛋白质的“密码对话”，还是蛋白质之间的“协作网络”，都需要通过精准的实验技术来揭示。本文用通俗易懂的语言，带您了解ChIP、荧光素酶报告基因、Co-IP、Pull-down四大技术的原理、步骤和应用场景，助您轻松掌握分子互作研究的核心工具！

一、

ChIP（染色质免疫共沉淀）：捕捉DNA与蛋白的“约会证据”

原理
ChIP技术通过甲醛交联“冻结”DNA与结合蛋白的相互作用，利用特异性抗体捕获目标蛋白及其结合的DNA片段，最终通过PCR或测序锁定DNA序列。

应用
研究转录因子结合位点、组蛋白修饰位点等。

实验步骤

交联固定：甲醛处理细胞，固定DNA-蛋白复合物

超声破碎：将染色质切割成200-1000bp片段

免疫沉淀：加入目标蛋白抗体，捕获复合物

解交联纯化：高温去除蛋白，纯化DNA

分析检测：qPCR、测序或芯片分析

注意事项
✔️ 抗体特异性是关键
✔️ 超声条件需优化避免过度破碎

二、

荧光素酶报告基因：基因调控的“信号灯”

原理
将待研究的DNA调控序列插入荧光素酶报告基因上游，通过检测荧光强度反映转录因子对目标序列的激活/抑制效应。

应用
启动子活性分析、miRNA靶标验证等。

实验步骤

载体构建：目标序列克隆至荧光素酶报告载体

细胞转染：与过表达质粒/干扰RNA共转染

裂解检测：加入荧光素底物，测定发光值

数据归一化：通常用海肾荧光素酶作为内参

注意事项
✔️ 设置空载体对照和阳性对照
✔️ 避免细胞密度过高影响转染效率

三、

Co-IP（免疫共沉淀）：蛋白质“社交网络”捕手

原理
利用抗体捕获靶蛋白时，与其直接互作的蛋白会被共同沉淀，通过WB验证互作伴侣。

应用
验证体内蛋白质相互作用、复合体组分鉴定。

实验步骤

裂解样本：使用非变性裂解液保持蛋白互作

预清除：用Protein A/G磁珠去除非特异性结合

抗体孵育：加入靶蛋白抗体或对照IgG

沉淀洗涤：收集复合物并洗去杂质

WB验证：检测沉淀物中是否存在互作蛋白

注意事项
✔️ 避免剧烈震荡导致复合物解离
✔️ 设置IgG阴性对照

四、

Pull-down：体外互作的“钓鱼实验”

原理
将诱饵蛋白（如GST标签蛋白）固定在基质上，与“猎物蛋白”溶液孵育，捕获特异性互作分子。

应用
验证直接相互作用、筛选互作蛋白。

实验步骤

诱饵蛋白制备：表达纯化带标签的重组蛋白

基质结合：将诱饵蛋白固定到GST/镍柱

孵育结合：与细胞裂解液/纯化蛋白共孵育

洗脱分析：SDS-PAGE或质谱鉴定结合蛋白

注意事项
✔️ 需设置空载体蛋白对照
✔️ 高盐洗涤减少非特异性结合

技术对比速查表

结语

分子互作技术如同解码生命的“侦探工具”，选择合适的方法需要根据研究目标（体内/体外、直接/间接作用）综合判断。掌握这些技术的原理和操作要点，将为您的课题研究提供坚实的技术支撑！

如有需要，请联系我们~

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1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

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CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

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4. 蛋白实验

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5. 病理实验

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