模型差异总结

模型优缺点与应用场景

模型构建案例

1. 实验方法

① 基因敲除（Knockout）

技术：CRISPR/Cas9或同源重组靶向删除特定外显子（如F8 exon 16/17）。

应用：小鼠血友病A/B型。

② 转基因（Transgenic）

技术：显微注射人类突变基因（如R539C、HLAD28/1*1501）至胚胎干细胞或受精卵。

应用：模拟人类错义突变。

③ 敲入（Knock-in）

技术：靶向插入特定突变（如R33Q、G581E）至内源基因位点，保留表达框架。

应用：研究CRM+/-表型。

④ 自然突变模型

技术：筛选自然发生的突变个体（如犬外显子22倒位）。

应用：犬血友病A型（Graham等, 1949；Hough等, 2002）。

2. 实验材料

动物品系：小鼠：C57BL6、BALB/c、C3H等近交系；犬：Chapel Hill、Queen品系。

基因工具：CRISPR/Cas9系统、重组载体、胚胎干细胞（传统方法）。

突变类型：外显子倒位、错义突变（R539C）、提前终止密码子。

3. 造模后验证与检测

3.1 病理检测

① 凝血功能评估：

APTT（活化部分凝血活酶时间）：显著延长（正常值：25-35秒；模型可达>60秒）。

凝血因子活性（FVIII:C/FIX:C）：ELISA或发色底物法检测，重型模型活性<1%。

② 出血表型观察：

尾部出血时间：小鼠>10分钟（正常<2分钟）。

自发性出血：关节肿胀（犬模型）、肌肉血肿（绵羊模型）。

3.2 分子蛋白检测

① 基因型验证：

PCR扩增+Sanger测序：确认外显子敲除或突变位点（如L176P）。

Southern blot：用于大片段缺失或倒位检测（如犬外显子22倒位）。

② 蛋白表达分析：

Western blot：检测FVIII/FIX蛋白缺失（敲除模型）或异常大小（突变模型）。

ELISA：定量血浆凝血因子水平（CRM+模型可能显示正常抗原但无活性）。

③ CRM状态鉴定：

交叉反应抗体：CRM+（蛋白存在但无功能，如R33Q）；CRM-（蛋白完全缺失，如G379E）。

注意事项

1. 品系选择：C57BL6小鼠免疫耐受性强，适合基因治疗；BALB/c易产生抗体，适合免疫研究。

2. CRM分类：CRM+模型需结合功能实验（如凝血活性检测）明确表型。

3. 自然突变模型：犬外显子22倒位与人类重型血友病A高度相似，是金标准模型。

通过系统选择模型，可针对不同研究目标（机制探索、治疗开发、长期安全性）优化实验设计。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

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康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

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