今天聊下细胞划痕实验的操作及分析步骤，细胞划痕实验（Cell scratch assay），也被称作伤口愈合实验（Wound healing assay），是一种模拟体内伤口愈合过程的体外实验技术。这项技术通过在细胞单层上制造一个“划痕”或“伤口”，并记录细胞如何填补这一空白区域，来研究细胞的迁移行为、修复能力以及细胞间的相互作用。感兴趣的小伙伴可以留言交流，加V回复更快！

实验步骤：

1 先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着均匀的划横线，间隔大约0.5-1cm，横穿过孔，每孔至少穿过5条线；

2 消化细胞，终止，制备细胞悬液，调整细胞悬液密度，6孔板每孔铺5×105左右各细胞，因为不同细胞的大小以及增殖速度有所不同，故每孔铺的细胞量也有所不同，以第二天划痕之前，细胞能够均一的铺板6孔板底为宜；

3 第二天，用200μL的黄色枪头，垂直于6孔板底部的横线进行划痕，枪头垂直，不要倾斜，最好使用同一枪头进行划痕；

4 用PBS洗涤3次，去除脱落的细胞，加入PBS时动作尽量轻柔，防止将其他贴壁细胞吹起，加入无血清或低血清培养基（若实验方案中提及需要用药物刺激，则根据实验方案进行相应的药物刺激），放入37℃，5% CO2培养箱中进行培养，根据实验方案中提供的观察时间进行观察、拍照（在划痕时会与6孔板底部形成若干交叉点，可将其作为固定的观察点，即可解决观察拍照时，前后位置不统一的情况）；

5 统计分析：使用Image J软件打开图片后，随机划取6-8条水平线，计算细胞间距离的平均值；每个时间点细胞整体迁移的距离=每个时间点的距离长度－0h的距离。

6 统计分析详细步骤：

a. 首先，打开Image J，File--Open选择要分析的图片,然后 image里面的Type,选择8-bit。

b . image--adjust--threshold--调到B&W--背景为白色，划痕面积为黑色--apply。

c .Anayze--Measure

e . 导出统计结果，每个时间点细胞整体迁移的距离=每个时间点的距离长度－0h的距离，分析。

注意事项：

1 辅助划线：在实验开始前，使用辅助线帮助确保划痕的直线性，这有助于后续的图像分析。重要的是，在拍照前要清除这些辅助线，以免影响结果。

2 细胞接种量：根据细胞的生长特性和速度来确定接种量，目标是在培养过夜后细胞能够完全融合，形成无空隙的单层。不均匀的细胞层可能会干扰图像分析和实验结论。

3 一致性划痕：在不同孔中制造划痕时，建议使用同一枪头以减少变异。在划痕过程中，确保枪头与细胞层垂直对齐，并可参照直尺或孔板盖来保持力度一致，以确保划痕的一致性。

4 轻柔冲洗：在冲洗细胞时，动作要轻柔，避免对细胞层造成破坏。使用贴壁的方式加入缓冲液，并多次重复以彻底清除细胞碎片。

5 控制细胞增殖：为避免细胞增殖对迁移结果的影响，可以采取以下措施：

使用无血清或低血清培养基（低于2%）来降低细胞增殖。

选择在细胞周期内（如6、12、24小时）的合适时间点进行观察，避免超过细胞的一个生命周期。

如果研究重点仅在于细胞迁移，可以考虑使用丝裂霉素（1µg/ml）预处理1小时以抑制细胞分裂。

6 划痕宽度的一致性：确保所有划痕的宽度一致是实验成功的关键。手工使用枪头制造划痕可能难以保证宽度的一致性，这可能影响实验结果。有条件的情况下，推荐使用特定的培养设备，如culture Insert，它允许在移除Insert后产生固定宽度的划痕，从而简化实验过程并提高结果的可重复性。

经过上述详细的步骤解析，相信您对细胞划痕实验的每一个细节都有了深刻的理解。如果您觉得本文对您或您的同事、朋友有帮助，请不要犹豫，点击收藏或转发，让更多人受益于这些宝贵的知识。科学的进步需要我们共同的努力和分享。每一次实验都可能是通往新发现的大门。关注我们的公众号，与我们一同科研，欢迎小伙伴分享自己的实验经验。感谢您耐心阅读到最后，您的支持是我们不断前行的动力。期待在下一次的分享中，我们能为您带来更多的科学知识和实验技巧。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

联系我们

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

联系方式：15579126092      

公司官网：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌县小蓝VR产业基地D座2楼