No.1

实验原理

小鼠心脏灌流实验，依托血液循环系统，向体循环注入固定液或生理盐水，以此清除血液并固定组织。该方法可有效消除血液对后续组织切片、免疫染色、基因测序等实验的干扰，同时维持组织的形态与结构完整性。

No.2

实验材料

耗材：1mL 注射器、输液器针头、止血钳、镊子、剪刀、导管，以及眼科镊、精细剪等解剖工具。

试剂：生理盐水、4% 多聚甲醛固定液、1.25% 三溴乙醇麻醉剂。

设备：蠕动泵、解剖台。

No.3

实验步骤

实验流程依次为：麻醉小鼠→固定小鼠→打开胸腔→生理盐水灌流→固定液灌流→组织取材。

麻醉小鼠：精确称量小鼠体重，按照 0.2mL/10g 的剂量注射 1.25% 三溴乙醇，每只小鼠注射量约 0.6mL。通常在 5 分钟内可实现完全麻醉，麻醉效果能维持 30 分钟。

固定小鼠：确认小鼠进入深度麻醉状态（捏尾尖或脚趾无反应）后，将其四肢的掌根与脚跟部位牢固固定在解剖台上，防止因小鼠挣扎而导致固定松动。

打开胸腔：先湿润小鼠腹部毛发，用镊子提起腹部皮肤，小心剪开腹部（注意避开脏器与肠道），随后剪开横隔膜（避免损伤肺脏），再剪断肋骨，充分暴露心脏。

生理盐水灌流：剪开右心耳，将输液器针头从心尖准确刺入左心室，以 15mL/min 的流速灌注生理盐水，持续约 3 分钟。

固定液灌流：观察到小鼠肝脏和爪子变白，表明血液已清除干净。此时，再灌注约 1 分钟生理盐水后，更换为 4% 多聚甲醛固定液。以 10mL/min 的速度灌注固定液，持续约 5 分钟。在此过程中，若观察到小鼠肌肉收缩、尾巴摆动，说明灌流环路通畅。

组织取材：待小鼠肝脏和四肢变硬，即表示灌流完成。小心剪取所需组织，若组织表面有残留血液，用生理盐水冲洗干净，然后转移至 4% 多聚甲醛固定液中保存。建议保存时间不超过 1 周，以免组织自发荧光增强，影响后续实验。

No.4

注意事项

进针方向：在左心室进针时，务必确保针头精准进入左心室，避免刺穿心室间隔进入右心室。

灌流速度：灌流速度不宜过快，防止灌流液流入肺脏，影响实验效果。

组织保存：灌流后的组织需及时置于 4℃固定液中保存，防止组织降解。实验过程中应采用体循环，因为肺循环易导致血液残留，实验效果不如体循环理想。

附：

体循环路径：左心室→主动脉→全身各级动脉→毛细血管网→各级静脉→上、下腔静脉→右心房

肺循环路径：右心室→肺动脉→肺部毛细血管网→肺静脉→左心房

No.5

参考资料

[1] 黄维,杨晓兰,马育,等.交联琼脂包嵌凹凸棒微囊重复大鼠血液灌流中生物相容性的初探[J].第三军医大学学报,2003,(12):1079-1081.

[2] Rana A, Massa PT, Chen XJ. A Gravity-Fed Transcardial Perfusion Method for Histologic Analysis of the Mouse Central Nervous System. J Vis Exp. 2022;(179):10.3791/63386.

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

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