CCK-8是一种在细胞生物学实验中广泛应用的试剂，用于检测细胞增殖和细胞毒性。它可以直接添加到细胞样品中，无需预先配制各种成分。细胞增殖越快，颜色越深，表明毒性较小；而细胞毒性越大，则颜色越浅。对于相同的细胞类型，颜色的深浅（即生成的formazan的量）与细胞数量呈线性关系。

实验材料及试剂：

细胞

96孔细胞培养板

CO2培养箱

酒精灯

微量移液器

酶标仪

CCK-8试剂盒等

实验步骤：

1、取生长状态良好的细胞，制备成一定浓度的细胞悬液。每孔加入100μl至96孔细胞培养板中。通常，细胞增殖实验每孔加入2×10³个细胞/100μl，细胞毒性实验每孔加入5×10³个细胞/100μl（具体每孔所用的细胞数目需根据细胞大小、增殖速度等因素决定）。贴壁细胞需在37℃培养箱中预培养2-6小时，待细胞贴壁后再进行实验；悬浮细胞则无需预培养。

2、根据实验需求，在培养孔中加入0-10μl待测样本，并继续培养适当时间。进行细胞毒性试验时，加入毒性物质后的培养时间需根据毒性物质的性质和细胞的敏感性来确定，通常至少需要1-2代以上的时间。

3、向96孔细胞培养板中每孔加入10μl CCK-8溶液，并在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。

4、测定吸光度。建议使用双波长进行测定，检测波长为430-490nm，参比波长为600-650nm；或者采用450nm单波长进行检测。

计算公式：

细胞存活率 = [(As - Ab) / (Ac - Ab)] × 100%

抑制率 = [(Ac - As) / (Ac - Ab)] × 100%

其中，As为实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液）；Ac为对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物）；Ab为空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞和药物）。

注意事项：

（1）如果细胞起始的培养体积为200μl，则需加入20μl的CCK-8溶液，以此类推。

（2）建议每个药物浓度孔设置3个复孔，并取均值进行数据分析。

（3）设计好实验对照，以排除其他因素的干扰：

空白对照：使用含有等量细胞培养液、CCK-8溶液和药物但没有细胞的孔。

阴性对照：使用未加药物但加了药物溶剂的细胞孔。

（4）试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应。如果待测物质具有氧化性或还原性，可能会干扰检测结果，需设法去除其影响（可在加入CCK-8溶液之前更换新鲜培养基以去除药物影响；如果药物影响较小，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收）。

（5）加入CCK-8溶液后需注意孵育时间，该时间根据细胞类型和细胞密度等实验条件而定。初次实验时，可在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪进行检测，并选择一个吸光度范围适宜的时间点用于后续实验。

（6）在培养箱内培养细胞时，培养板最外边的孔容易干燥挥发，导致体积不准确而增加误差。因此，最外一圈的孔通常只加培养基，不作测定孔用。

（7）若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μl 10% SDS溶液以终止反应，并将培养板遮盖避光保存在室温条件下。建议在24小时内进行测定，虽然吸光度变化不会太大，但还是建议尽快进行检测。

（8）在使用酶标仪进行检测之前，请确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定结果。

声明：文章、图片等所有内容来源于网络，仅用于学习交流，若有侵权内容及其他涉法内容，请及时联系删除或修改。

主营项目

1. 动物实验

动物饲养、疾病造模、行为学检测、心功能、无创血压、血常规、全自动生化检测等

2. 细胞实验

CCK8/MTT、原代细胞分离、流式细胞实验、细胞划痕、侵袭、迁移、EDU染色、转染、稳定株

3. 分子生物学

PCR检测、荧光定量PCR、绝对定量PCR、端粒酶长度、pull down、双荧光素酶、SSR、SNP检测等

4. 蛋白实验

WB、Co-IP、酵母双杂

5. 病理实验

HE染色、免疫组学、电镜

6. 生理生化实验

肝肾功能、抗氧化、免疫反应等生理免疫指标;动植物营养指标、微量元素、重金属、酶活等。

7. 多组学实验

基因组、转录调控、蛋白组、代谢组、微生物多样性、宏基因组、生信分析

8. 整体课题实验

方案设计、整体实验交付、标书写作、论文润色、协助投稿

康旭禾生物提供包括动物实验、细胞实验、分子实验、病理实验、流式检测实验及论文翻译、润色、投稿辅助等相关的各项服务。

联系方式：15579126092      

公司官网：http://consurebio.com/

公司地址：江西省南昌市南昌县小蓝VR产业基地D座2楼